何芳 馮磊 沈健

（浙江大學(xué)營(yíng)養與食品安全研究所，杭州，310006）

前言
20世紀30年代Wernen根據50歲以上男子出現的神經(jīng)心理癥狀、血管運動(dòng)癥狀、體能下降和性功能減退癥狀癥狀(和婦女更年期綜合征相似)首先提出了“男子更年期綜合征”，開(kāi)始引起了人們對男性健康的關(guān)注。隨著(zhù)微量檢測技術(shù)的進(jìn)步，近20年來(lái)許多學(xué)者紛紛從不同的角度證明血漿睪酮水平確實(shí)隨年齡老化而減低，馬薩諸塞大學(xué)和巴爾的摩大學(xué)則分別從橫向和縱向研究進(jìn)一步證明血漿睪酮水平隨年齡老化而下降[1-2]。眾多的研究證實(shí)了男子的雄激素分泌在青年期達到高峰后逐漸下降這一事實(shí)。世界上60歲以上的人口將由1999年的5.93億（約占總人口的10%）增加到2050年的19.7億（約占總人口的22%）[3]。隨著(zhù)世界人口老齡化的加快，中老年男子的健康問(wèn)題也越來(lái)越引起人們的關(guān)注。
1998年2月第一屆國際老年男性醫學(xué)會(huì )議上，中老年男子部分性雄激素缺乏綜合征（partial androgen deficiency of the aging male, PADAM）被提出。PADAM是指中老年男子隨著(zhù)年齡的增加而雄激素生成進(jìn)行性下降，血清睪酮水平低于健康青年男性的正常范圍（可以伴有或不伴有基因組對雄激素及其活性代謝產(chǎn)物敏感性的降低），并出現一系列雄激素部分缺乏的相應臨床癥狀和體征的一組綜合征。主要包括神經(jīng)心理癥狀、血管運動(dòng)癥狀、體能下降和性功能減退癥狀等，實(shí)驗室檢查表現為體內雄激素水平下降。目前國內外多采用睪酮補充治療，睪酮治療改變身體組成，提高體能、能提高性欲、糾正情緒障礙、提高骨密度，增加脂質(zhì)代謝等，但是雄激素補充治療引起的紅細胞增多、前列腺增生癥以及前列癌的潛在影響也引起人們的密切關(guān)注[4-6]，從而影響了睪酮補充治療的臨床應用。
研究證明，許多微營(yíng)養素對于機體具有抗氧化作用，與人體的生殖功能、精子生成、雄激素合成與分泌都有一定的關(guān)系，尤其是維生素A、維生素C、維生素E、微量元素鋅和硒[7-10]。但目前對于如何建立PADAM的動(dòng)物模型還沒(méi)有報道，通過(guò)查閱文獻發(fā)現在衰老的動(dòng)物模型中動(dòng)物的雄激素水平是下降的，因此本實(shí)驗通過(guò)建立衰老的動(dòng)物模型來(lái)研究補充維生素A、維生素C、維生素E、微量元素鋅和硒幾種微營(yíng)養素復合制劑對致衰雄性小鼠雄激素水平的影響和抗氧化作用。

實(shí)驗材料
1.實(shí)驗動(dòng)物
實(shí)驗動(dòng)物為ICR小鼠，雄性，三個(gè)月齡體重30g~40g，清潔級，由浙江省實(shí)驗動(dòng)物中心提供。動(dòng)物飼料由浙江大學(xué)實(shí)驗動(dòng)物中心提供，執行標準GB12924-94。飼養條件符合浙實(shí)動(dòng)設施標準第2001001號的要求。

2.主要試劑
2.1. 硫酸鋅（ZnSO4·7H2O）：批號：2005年2月23日由杭州諾金食品有限公司提供。

2.2. 維生素C：批號：2005年2月23日由杭州諾金食品有限公司提供。

2.3. 維生素A：批號：2005年2月23日由杭州諾金食品有限公司提供。

2.4. 維生素E：批號：2005年2月23日由杭州諾金食品有限公司提供。

2.5. 亞硒酸鈉（1%Na2SeO3）：批號：2005年2月23日由杭州諾金食品有限公司提供。

2.6. 游離睪酮（0.25g/支）：批號：20050305由浙江省計劃生育研究所提供。

2.7. 睪酮測定試劑盒（DSL-10-4000）：LOT：03295，DSL公司出品。

2.8. 谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）活力測試盒：批號：200500514購南京建成生物有限公司。

2.9. 超氧化物歧化酶（SOD）活性測試盒：批號：20050514購南京建成生物工程研究所提供。

2.10.D半乳糖：批號：20030828上海試劑二廠(chǎng)

2.11.其他試劑均為國產(chǎn)（分析純）。

3.主要試劑配制

3.1 劑量換算
根據人（70kg）與小鼠（20g）劑量換算比例為0.0026[11]，根據人體微營(yíng)養素攝入量UL值，計算小鼠所需劑量。維生素A：0.39μg/g；維生素E：0.104mg/g；維生素C：0.13mg/g；ZnSO4·7H2O：0.029mg/d；1%Na2SeO3：8.34μg/g；睪酮：0.0325mg/g。

3.2 微營(yíng)養素復合制劑的制備
稱(chēng)取維生素E 1.26g，維生素A 2.4mg，用研缽將維生素A和維生素E研磨加入兩滴助溶劑吐溫-80和少量蒸餾水，使其充分混合再加入維生素C 0.78g、ZnSO4.7H2O 0.3mg、Na2SeO384.3μg使均勻混合后用蒸餾水定容至60mL，放在4℃冰箱中備用。

3.3 D半乳糖溶液的配制
取D半乳糖25g，生理鹽水250mL，將25g D半乳糖倒在500mL的燒杯中，倒入生理鹽水200mL，用玻璃棒攪拌使其充分溶解，放入試劑瓶中。用剩下的生理鹽水沖洗燒杯和玻璃棒，將沖洗液也倒入試劑瓶中搖晃使其充分混合。放置4℃冰箱中備用。

3.4 游離睪酮稀釋液的配制
取游離睪酮1mL，加幾滴無(wú)水酒精使其溶解，再加生理鹽水153mL充分混合后，放置4℃冰箱中備用。

實(shí)驗方法
1.亞急性衰老動(dòng)物模型的建立及處理

1.1 亞急性衰老動(dòng)物模型建立的方法：
給三個(gè)月齡ICR雄性小鼠，每天頸背部皮下注射D半乳糖（配制同前）1mg/g，連續8周即可造成亞急性衰老模型，其衰老程度接近與21個(gè)月齡水平[11]。

1.2 實(shí)驗處理及分組
將三個(gè)月齡的ICR雄性小鼠60只，按體重隨機分成兩個(gè)組，即正常對照組（12只）、衰老模型組（48只）。正常對照組和造模組每天頸背部皮下按0.1ml/10g劑量分別注射生理鹽水和D半乳糖。兩個(gè)組小鼠均自然進(jìn)食正常飼料，自由飲水。持續8周后取尾血測定全血中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSHPx）和紅細胞中超氧化物歧化酶（SOD）酶活性，將確定造模成功小鼠取尾血測定血清中雄激素。按血清雄激素水平將致衰小鼠分為模型對照組、微營(yíng)養素組、雄激素組、微營(yíng)養素+雄激素組四個(gè)組,每組12只。模型對照組小鼠每日給予蒸餾水灌胃，微營(yíng)養素組小鼠每日用微營(yíng)養素復合制劑灌胃，雄激素組小鼠每周背部皮下注射一次游離睪酮，微營(yíng)養素+雄激素組小鼠每日用微營(yíng)養素復合制劑灌胃且每周背部皮下注射一次游離睪酮。四組小鼠每日均自然進(jìn)食普通飼料，自由飲水，每周稱(chēng)量體重一次，持續4周。取小鼠血清及肺、心、腦、肝臟組織測定血清睪酮水平、組織中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSHPx）活性、超氧化物歧化酶（SOD）酶活性。

2.觀(guān)察指標，原理及方法

2.1 組織勻漿制備
將所有試驗小鼠以頸椎脫臼法處死，迅速進(jìn)行解剖，以眼科小剪將肺、肝、心以及腦組織剪下，而后立即將組織塊置入冰冷的生理鹽水中漂洗，以除去血液，用濾紙拭干后，將其放入冰浴的小燒杯中。用量筒取出少量預冷的生理鹽水（0.86%的氯化鈉溶液），為組織重量的9倍，用組織搗碎機上下研磨制成10%組織勻漿。而后將所有的組織勻漿都置入-70℃冰箱保存備用。

2.2 紅細胞超氧化物歧化酶（SOD）活性的測定：按試劑盒測定步驟進(jìn)行。

2.3 全血中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSHPx）活力的測定：按試劑盒測定步驟進(jìn)行。

2.4 組織勻漿中超氧化物歧化酶（SOD）的測定：按試劑盒測定步驟進(jìn)行。

2.5 睪酮水平測定：按試劑盒測定步驟進(jìn)行。

統計分析
采用SPSS12.0 for windows統計軟件。計量資料分別經(jīng)正態(tài)分布和方差齊性檢驗，方差齊性采用方差分析兩兩比較得到相應的P值，方差不齊采用非參數檢驗。同組樣本實(shí)驗前后比較采用t檢驗。P＜0.05為顯著(zhù)性差異。所有數據以(x-±SD）表示。
實(shí)驗結果
3.1 D半乳糖致衰模型的建立
每天給模型組小鼠于頸背部皮下注射D半乳糖，連續8周，取尾血測定血中的谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSHPx）活力和紅細胞超氧化物歧化酶（SOD）活力。進(jìn)一步確定模型成功建立。
衰老模型組與正常對照組比較，全血中的谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSHPx）活力和紅細胞超氧化物歧化酶（SOD）活力兩項生化指標都降低，并具有明顯差異，說(shuō)明模型建立成功。見(jiàn)表1。

表1正常對照組與衰老模型組GSHPx
和SOD活力的比較（x-±SD）

3.2 微營(yíng)養素對致衰小鼠雄激素水平的影響
微營(yíng)養素對致衰小鼠血清雄激素水平實(shí)驗前后比較，三個(gè)實(shí)驗組血清雄激素水平在實(shí)驗后較實(shí)驗前均有升高，且實(shí)驗后血清雄激素升高具有顯著(zhù)性差異。實(shí)驗后三個(gè)實(shí)驗組間雄激素比較無(wú)顯著(zhù)性差異。見(jiàn)表2。

表2微營(yíng)養素對致衰小鼠雄激素水平
實(shí)驗前后比較（x-±SD）

3.3 微營(yíng)養素對致衰小鼠肺、心、腦、肝臟
GSHPx活力的影響
微營(yíng)養素對致衰小鼠不同臟器GSHPx活力均有升高，微營(yíng)養素組在心、肺、腦勻漿中GSHPx的活力明顯高于模型對照組在統計學(xué)上有顯著(zhù)性差異。見(jiàn)表3。

表3微營(yíng)養素對致衰小鼠肺、心、腦、肝臟GSHPx活力的影響（x-±SD）

3.4 微營(yíng)養素對致衰小鼠肺、心、腦、肝臟
總SOD活力的影響
微營(yíng)養素對于致衰小鼠不同臟器SOD活力有升高的趨勢，特別在心和腦勻漿SOD的活力微營(yíng)養素組與模型對照組比較具有顯著(zhù)性差異。見(jiàn)表4

表4微營(yíng)養素對致衰小鼠肺、心、腦、肝臟總SOD活力的影響（x-±SD）

討論
D-半乳糖致衰模型是國內外眾多學(xué)者研究后提出的一種“早衰老”動(dòng)物模型，是基于衰老的代謝學(xué)說(shuō)而復制的衰老模型，該模型系在一定的時(shí)間內給動(dòng)物連續注射D-半乳糖，使其細胞內半乳糖濃度增高，在醛糖還原酶催化下，還原成半乳糖醇，后者不能被細胞進(jìn)一步代謝而堆積在細胞內，影響正常滲透壓，導致細胞腫脹，功能障礙，代謝紊亂，最終機體衰老[12]。其各項指標已具備老年小鼠的特征，以往的眾多實(shí)驗也充分證明了它是穩定、可靠的衰老模型。動(dòng)物實(shí)驗表明，大鼠經(jīng)皮下注射D-半乳糖后，免疫與性器官重量明顯減輕及性激素水平降低。衰老的免疫學(xué)說(shuō)認為免疫功能與性功能的逐漸變低導致機體衰老[13]。自從Harman在1955年提出了自由基理論，闡明了其在衰老過(guò)程中的可能機制以來(lái)[14]，經(jīng)過(guò)半個(gè)多世紀的進(jìn)一步研究，大量的流行病調查[15]、動(dòng)物試驗[16]以及人群干預試驗都表明，自由基導致的損傷，不僅影響人體的衰老過(guò)程，而且在許多疾病，比如心腦血管疾病[17,18]，腫瘤[19]，糖尿病等[20]的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中都起到了至關(guān)重要的作用。自由基的強氧化活性引發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化，改變細胞膜的穩定性，從而使細胞的結構和功能發(fā)生退行性改變，還可以與蛋白質(zhì)形成復合物，積累成脂褐質(zhì)，直接或者間接危害人體器官的功能，導致代謝失調，和機體的衰老；同時(shí)，自由基還可能導致類(lèi)似于放射暴露所造成的DNA損傷[21]包括DNA的單鏈或者雙聯(lián)的斷裂，DNA的氧化損傷及DNA加合物的形成，從而通過(guò)基因突變，或者原癌基因激活及抑癌基因的失活在腫瘤的引發(fā)和促進(jìn)階段發(fā)生作用，并最終導致腫瘤的形成。自由基能夠導致脂質(zhì)過(guò)氧化，從而損傷膜的功能和完整結構，并使一些能夠識別膜上受體而發(fā)揮生物學(xué)活性的酶失活，造成細胞損傷[22]。除此以外，它還會(huì )導致蛋白質(zhì)的氧化失活，造成DNA的氧化損傷，從而使基因易于發(fā)生突變。衰老或老化機體存在著(zhù)一定的抗氧化能力衰退或下降趨勢，具體表現為自由基代謝異常，體內MDA含量升高，SOD、GSHPx等抗氧化酶活性降低，使積聚過(guò)多的自由基首先對線(xiàn)粒體內膜不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化發(fā)應，最終可導致維持正常生命活動(dòng)的能力減少，新陳代謝紊亂，自身內外環(huán)境調節功能失衡，加快了機體的衰老和死亡[23]。SOD廣泛存在于生物體內，SOD是體內重要的抗氧化酶，是唯一能夠特異性地清除重要的衰老啟動(dòng)因子超氧自由基（·O2-）的抗氧化物。SOD是人體抗氧化的一線(xiàn)酶，起到至關(guān)重要的作用，它能夠歧化·O2-為H2O2，從而減少了形成氧化型更強也更難清除的·OH形成的危險[24]。SOD能夠阻斷由·O2-或由外界進(jìn)入體內的一些藥物或毒物及由輻射產(chǎn)生的氧離子起到積極的作用[25]。它的活性下降使自由基產(chǎn)生過(guò)量，引起不飽和脂肪酸氧化生成過(guò)氧化物，形成脂褐素和使DNA、蛋白質(zhì)和酶等改變、破壞，從而加速衰老[26]。GSHPx是動(dòng)物體內的一種含硒酶，具有清除過(guò)氧化物和保護細胞免于氧化損傷，通過(guò)阻斷LOOH引發(fā)自由基的二級反應，從而減少LOOH對生物體的損害，保護細胞膜系統免遭過(guò)氧化的損傷[27]。GSHPx的主要生理功能是維持細胞內較低氫過(guò)氧化物水平，減少潛在的自由基損傷，它是氫過(guò)氧化物的第二道防線(xiàn)，能夠催化還原型的谷胱甘肽轉變成為相應的氧化態(tài)，即二硫化谷胱甘肽[28]，通過(guò)谷胱甘肽還原酶和黃素腺嘌呤脫氫酶將氫過(guò)氧化物分解為水[29]。
研究發(fā)現，許多微營(yíng)養素與機體的生殖功能、精子生成、雄激素合成與分泌、自由基的清除、及抗氧化作用都有一定的關(guān)系，尤其是維生素A、維生素E、維生素C、微量元素鋅和硒。
鋅是人體必需的微量元素，它是人體多種酶的輔因子，并調控其活性。它可能并不與氧化劑直接作用，而主要是通過(guò)穩定細胞膜的結構和作為SOD的一種結構成分，間接地發(fā)揮作用[30]。缺鋅使DNA、RNA聚合酶活性降低,DNA、RNA和蛋白質(zhì)合成障礙,使細胞增殖受阻。同時(shí)使3β羥類(lèi)固醇脫氫酶活性降低,則使睪酮合成障礙[31]。試驗表明，給小鼠富鋅飼料或給予鋅補充，其血漿，肝和胰腺的MDA水平較對照組顯著(zhù)降低，而其中血、肝中GSH含量和SOD活性則明顯升高，表明鋅在控制體內過(guò)氧化脂質(zhì)的過(guò)程中起到重要作用[32]。

鋅是存在于精液中的一種重要的微量元素，精漿鋅對男性生殖功能有非常重要的作用：參與生殖系統多種酶的組成；可延緩精子細胞膜的脂質(zhì)氧化，以維持胞膜結構的穩定和通透性，在精漿缺乏鋅時(shí)，精漿超氧化物歧化酶含量降低，氧自由基產(chǎn)生增加，精漿抗氧毒性能力下降。研究表明，鋅缺乏的動(dòng)物，睪丸活檢發(fā)現間質(zhì)細胞減少，長(cháng)時(shí)間鋅缺乏可導致血清睪酮和LH水平降低[33]。鋅不足可影響下丘腦—垂體—性腺軸，而使垂體分泌的促進(jìn)腺激素減少，影響了Leydig細胞睪酮合成功能，體內睪酮水平下降；睪酮的合成需要多種與鋅有關(guān)的酶的參與才能完成，因而鋅缺之可使睪酮合成減少[34]；缺鋅對睪丸有特殊損害作用，影響間質(zhì)細胞（Leydig細胞）產(chǎn)生和分泌睪酮。
硒是人體重要的微量元素，其主要生物學(xué)作用是構成谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSHPx)的重要成分，催化還原型谷胱甘肽(GSH)為氧化型谷胱甘肽(GSSG)，使有毒的過(guò)氧化物變成無(wú)毒的羥基化合物。硒在男性生殖過(guò)程的作用已經(jīng)越來(lái)越引起人們的重視。據最新研究報道[35]，人類(lèi)精子線(xiàn)粒體囊泡中存在一種特異GSHPx稱(chēng)為磷脂過(guò)氧化氫谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(PHGPx)，硒是其重要組成成分。在精子細胞中，PHGPx具有與其他GSHPx相同的過(guò)氧化物酶活性，但隨著(zhù)精子的成熟，其過(guò)氧化物酶活性逐步失活，并最終成為精子線(xiàn)粒體結構蛋白的一部分，對維持精子鞭毛結構和功能的完整性有重要作用。精液缺硒引起的精子質(zhì)量下降可能與缺硒引起的抗氧化作用下降有關(guān)[36]。它作為一種抗氧化物質(zhì),在體內外均有抑制脂質(zhì)過(guò)氧化作用，認識硒對性腺細胞睪酮的合成具有一定的影響,為從營(yíng)養角度防治PADAM開(kāi)劈新途徑。近年來(lái)，硒作為是谷胱甘肽的活性結構含硒半胱氨酸的必要組成成分，其抗氧化特性受到了廣泛的關(guān)注。硒是近年來(lái)受到廣泛關(guān)注的一種微量元素。含硒蛋白，包括許多有重要功能的酶都是硒依賴(lài)的，硒代半胱氨酸占據著(zhù)其中的活性位點(diǎn)，作為氧化還原中心，在含硒酶如硫氧還蛋白還原酶，在DNA合成過(guò)程中還原核苷酸，以及維持細胞內的氧化還原狀態(tài)中都起到了重要的作用。硒最眾所周知的氧化還原功能，是通過(guò)硒依賴(lài)的谷胱甘肽過(guò)氧化物酶家族還原氫過(guò)氧化物和已發(fā)生損傷的脂質(zhì)和磷脂氫過(guò)氧化物轉化為無(wú)害的產(chǎn)物如水和乙醇這些功能有助于維持細胞膜結構的完整性，并保護前列環(huán)素產(chǎn)物和脂質(zhì)，脂蛋白以及DNA等免受氧化損傷[37]。
維生素E又名生育酚（tocopherol），具有α、β、γ、δ四種異構體，其中以α生育酚的生理活性最高。其C6上的-OH及易被氧化，是其具備抗氧化作用的關(guān)鍵結構，維生素E在自然界分布廣泛，主要存在于植物油中。
維生素E作為人體一種必需維生素，它具有較強的抗氧化作用，即能清除自由基，對抗生物膜磷脂中多不飽和脂肪酸的過(guò)氧化反應，避免脂質(zhì)過(guò)氧化物產(chǎn)生，從而保護生物膜結構和功能[38]。對生殖功能又有重要作用。當人類(lèi)缺乏維生素E時(shí)，體內過(guò)氧化物增多而引起蛋白質(zhì)、基因損傷，影響Leydig細胞合成睪酮的功能導致體內睪酮水平下降。由于腦垂體和腎上腺內有很高濃度的維生素E，能刺激這兩個(gè)腺體的促性腺激素，并在中樞神經(jīng)內調節性腺功能[39]，對于治療男性性功能減退有很好的療效，大鼠缺乏維生素E時(shí)，生殖器官受損,雄鼠睪丸萎縮[40]。
維生素A是一種具有β白芷酮環(huán)的不飽和一元醇。天然維生素A包括A1及A2兩種，A1即視黃醇，A2即3脫氫視黃醇，其前身物質(zhì)為胡蘿卜素，通常以β胡蘿卜素為代表，但它只有視黃醇1/6的生物學(xué)活性。
維生素A的基本作用包括：促進(jìn)發(fā)育及維持健康；參與糖蛋白合成，作為單糖轉運載體；抗癌和抗氧化作用；以及對于調節細胞的生長(cháng)、分化與分裂等都具有重要作用。在生殖功能方面的作用與其對生殖系統上皮組織的影響有關(guān)。維生素A在生長(cháng)發(fā)育以及在維持機體正常生理功能方面都發(fā)揮重要作用。維生素A缺乏會(huì )導致暗適應力下降、生長(cháng)遲滯、睪丸、卵巢等器官萎縮、影響雄性動(dòng)物精子的生成、上皮細胞角化過(guò)度等，還可導致大鼠精子生成量、支持細胞和精曲小管生精功能的改變[41]。維生素A缺乏阻礙各級生精細胞生長(cháng)發(fā)育，導致睪丸組織萎縮（臟器系數下降），睪酮生成水平下降，精子數也減少，畸形精子數增多，對精子發(fā)育有明顯作用[42]。
維生素C又名抗壞血酸（ascorbic），是一種含有6個(gè)碳原子的酸性不飽和多羥化合物，以?xún)弱バ问酱嬖冢哂兴嵝裕芊乐螇难　＞S生素C在細胞內，是一個(gè)強還原劑或電子供體，抗氧化是維生素C的一個(gè)主要功能，它可以還原超氧化物、羥基、次氯酸及其他活性氧化物，這些氧化物可損傷DNA，并可影響DNA轉錄、蛋白質(zhì)或膜結構，維生素C由于其還原性質(zhì)，可使雙硫鍵（-S-S-）還原為巰基（-SH），在體內與其他抗氧化劑一起清除自由基。另外，維生素C可促進(jìn)維生素E再生（維生素C可能在脂質(zhì)顆粒或膜中把電子傳遞到生育酚），減少低密度脂蛋白膽固醇（LDLC）的氧化，有利于膽固醇存儲于胞質(zhì)脂質(zhì)體內，促進(jìn)睪酮的生成。
綜上所述，本實(shí)驗主要通過(guò)對致衰雄性小鼠補充維生素A、維生素E、維生素C、微量元素鋅和硒五種微營(yíng)養素的復合制劑觀(guān)察小鼠雄激素水平的變化及抗氧化酶的活性，結果發(fā)現致衰小鼠的雄激素水平實(shí)驗后高于實(shí)驗前，在微營(yíng)養素組這種差異具有顯著(zhù)性。本實(shí)驗造模成功的小鼠也顯示SOD和GSHPx活力下降，給予微營(yíng)養素復合制劑后SOD和GSHPx活力均有升高且具有顯著(zhù)性差異。維生素A、維生素E、維生素C、微量元素鋅和硒是機體必需的營(yíng)養素，它們是機體多種酶的輔因子，并調控其活性。通過(guò)不同的途徑直接或間接地調節機體雄激素的生成和自由基的清除發(fā)揮抗氧化的作用。對于以上五種微營(yíng)養素作用機制已有相關(guān)報道但將其復配后研究尚少。本研究也只是將復合制劑對雄激素影響及抗氧化作用做了一個(gè)初步的研究，然而對其機理方面還需進(jìn)一步的探討。

參考文獻
[1] Gray A, Feldman A, Mekinlay JB, et al. Age, disease and changing sex hormone levels in middle aged men: results of the Masschusetts Male Aging Study [J].ＪClin Endocrinol Metab, 1991; 73:1016-10252.
[2] Harman SM, Metter EJ, Tobin JD, et al. Longitudinal effects of aging on serum total and free testoerone levels in healthy men [J]. J Clin Endocrinol Metab, 2001; 86:724-731.
[3] 郭應祿，李宏軍.男性更年期綜合征[J] .中國男科學(xué)雜志，2004; 10(8):563-566.
[4] 李江源.中國中、老年男子部分性雄激素缺乏綜合征診斷、治療和監測的基本原則[J].中國男科學(xué)雜志, 2002; 17(1):66-68.
[5] 庶民，伍建業(yè)，許進(jìn)，等.中老年部分雄激素缺乏的臨床研究[J].中國男科學(xué)雜志, 2003; 17(5):357-358.
[6] 鄭曉春，陳淑英，鄭松柏，等.中老年男性血清睪酮、游離睪酮、雙氫睪酮和性激素結合球蛋白含量的變化[J].中國男科學(xué)雜志, 2003; 17(4):242-243.
[7] Prasad AS, Mantzoros CS, Beck FW, et al. Zinc status and serum testosterone levels of healthy adults [J]. Nutrition, 1996; 12(5):344-348.
[8] Haudhary LR, Hutson JC, Stocco DM. Effect of retinal and retinois acid on testosterone production by rat leycling cells in primary culture [J]. Biochem Biophys Res Commun, 1989; 158(2):400-406.
[9] Behned D, Weiler H, Kyriakopoulos A. Effects of selerium deficiency on testicular morphology and function in rats [J]. J Reprod Fertil, 1996; 106(2):291-297.
[10] Ujjal Baran Das, et al.維生素C對環(huán)磷酰胺誘導雄大鼠睪丸配子和雄激素生成障礙的保護作用[J]. Asian J Androl, 2002; 4:201-207.
[11] 徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實(shí)驗方法學(xué). 2002; 1465-1466.
[12] Song X, Bao M, Li D. Advanced glycation in Dgalactose induced mouse aging model [J]. Mech Ageing Dev, 1999; 108(3):239-251.
[13] 陳樹(shù)元,金偉軍,陳志良等 D半乳糖致大鼠亞急性衰老模型的建立[J].第一軍醫大學(xué)學(xué)報1995; 15(3):233.
[14] Harman D. Aging a theory based on free radical and radiation chemistry [A]. Unclassified Health and biology [C], The Us Atomic Energy Commission, UCRL, 1955; 30-78.
[15] Choi M.A, Kim BS, Yu R. Serum antioxidative vitamin levels and lipid peroxidation in gastric carcinoma patients [J]. Cancer Lett. 1999;8; 136(1):89-93.
[16] Chakraborty A, Selvaraj S, Sudarshan M.et al, Modulatory role of vanadium on trace element profile in diethylnitrosamineinduced rat hepatocarcinogenesis [J].Nuclear Instruments and Methods in Physics Research Section B: Beam interactions with Materials and Atoms.2000; 170 (1-2):156-162.
[17] Westhuyzen J. The oxidation hypothesis of atherosclerosis: an update[J]. Ann. Clin. Lab. Sci. 1997; 27(1):1-10.
[18] Miller E.R.3rd, Appel L.J, Levander O.A, et al. The effect of antioxidant vitamin supplementation on traditional cardiovascular risk factors[J]. J. Cardiovasc. Risk 1997;4(1):19-24.
[19] Dreher D, Junod A.F.Role of oxygen free radicals in cancer development [J]. European Journal of Cancer,1996; 32(1):30 38.
[20] Karasu C,Ozansoy G, Bozkurt O, et al. Antioxidant and triglyceridelowering effects of vitamin E associated with the prevention of abnormalities in the reactivity and morphology of aorta from streptozotocindiabetic rats. Antioxidants in DiabetesInduced Complications (ADIC) Study Group [J]. Metabolism 1997; 46(8):872-9.
[21] Ames, Bruce N.DNA damage from micronutrient deficiencies is likely be a major cause of cancer[J].Mutation Research, 2001; 475(1-2):7-20.
[22] Gutteridge JM, Halliwell B., Oxygen radicals and tissue injury [J]. FASEB, 1988;9-19.