陳玉滿(mǎn)陳江吳惠嶺傅劍云徐彩菊
（浙江省疾病預防控制中心，杭州，310009）

摘要：目的探討鮮皇漿對小鼠輻射損傷的保護作用。方法將160只小鼠隨機分為3個(gè)試驗組，劑量分別為0.80g／kg，1.78g／kg和5.00g／kg，另設一個(gè)輻射對照組，每天灌胃1次，連續30天后，各組均以60Co射線(xiàn)進(jìn)行一次全身照射，并繼續給樣品，根據檢測指標選擇不同的照射劑量。輻照前、輻照后第3和14天進(jìn)行外周血細胞計數；輻照后第3天進(jìn)行骨髓有核細胞計數和骨髓細胞微核試驗；輻照后第7天進(jìn)行超氧化物岐化酶（SOD）活力測定；輻照后第14天測定血清溶血素。結果3個(gè)試驗組小鼠外周血白細胞數、骨髓有核細胞數和血清溶血素含量明顯高于輻射對照組（P＜0.05），骨髓微核率明顯低于輻射對照組（P＜0.05）,血清SOD活力高于輻射對照組，但無(wú)統計學(xué)差異（P＞0.05）。結論鮮皇漿對輻射損傷具有一定的防護作用。
關(guān)鍵詞：鮮皇漿；輻射損傷；外周白細胞；骨髓有核細胞數；微核；超氧化物歧化酶；溶血素

The Study on The AntiIrrradiating Damage
Activities of Fresh Royal Jelly
Yuman ChenJiang ChenHuiling WuJianyun FuCaiju Xu
The Center of Disease For Prevention And Control of Zhejiang Province, 310009

Abstract：Objective To evaluate the protective effects of fresh royal jelly on mice with irradiating damage induced by 60Cogammaray. Methods160 mice were divided into irradiating control group and three experiment groups. The mice of the experiment groups were be treated(P.O) fresh royal jelly with different concentration(0.80g／kg,1.78g／kg and 5.00g／kg) for 30 days. Then all animals were irradiated by 60Cogammaray, The animals of three experiment groups were be continued to be treated fresh royal jelly. The number of white blood cells(WBC) were counted before irradiating, on 3 and 14 day after irradiating, The number of karyota of femur and the frequency of micronuclei in polychromatophilic erythrocytes of bone marrow in mice were measured on 3 day after irradiating, The activities of superoxide dismutase(SOD) in serum were measured on 7 day after irradiating, and The level of Hemolysin were measured on 14 day after irradiating. ResultsCompared with the measurements in the irradiating control group, the number of WBC and karyota of femur, and the level of Hemolysin in the three experiment groups were increased significantly(P＜0.05),while the frequency of micronuclei in polychromatophilic erythrocytes of bone marrow in the three experiment groups were decreased significantly(P＜0.05),and the activities of SOD in serum in the three experiment group were increased, but no significant difference. ConclusionThe fresh royal jelly have protective effects on mice with the irradiating damage induced by gamma-ray.
Keywords： Royal jelly; Irradiating damage; WBC; The number of karyota of femur; Micronuclei; Superoxide dismutase; Hemolysin

電離輻射可以引起多種組織和器官的損傷，甚至誘發(fā)細胞突變、癌變、致死等嚴重后果，利用天然植物中的有效活性成份，增強機體抵抗力，防止或減輕輻射對人體健康的危害，在輻射防護中具有越來(lái)越重要的地位。
近年來(lái)從鮮皇漿中分離出多種有效活性成分，主要有黃酮類(lèi)、酵素、激素類(lèi)、酶類(lèi)、活性酸、多糖類(lèi)、十幾種氨基酸和多種微量元素及多種維生素，但仍有3％左右的成分不能確定［1］。已發(fā)現鮮皇漿具有抗疲勞、抗衰老、耐缺氧、抑制腫瘤、提高免疫力和調節血糖血壓等多種生物學(xué)作用，但尚未見(jiàn)其具有抗輻射損傷保護作用的報道［2-5］。為探討鮮皇漿對輻射損傷的保護作用，我們采用小鼠進(jìn)行抗輻射實(shí)驗研究。
1 材料與方法
11 材料
純鮮皇漿，由浙江省某保健公司提供。
12 實(shí)驗動(dòng)物
清潔級ICR小鼠160只，雄性、體重18—22克。由浙江省中醫學(xué)院實(shí)驗動(dòng)物中心提供，合格證號：SCXK(滬)2002-0010。每組40只。
13 試驗方法［6］
131 劑量設置設3個(gè)試驗組和1個(gè)輻射模型對照組，3個(gè)試驗組給予的劑量分別為0.80g／kg、178g／kg、500g／kg。輻照模型對照組給予等量的去離子水。各組灌胃給樣品1次／天，灌胃量01ml／kg體重。
132 輻照條件各組于輻照前灌胃給樣品，每天一次。連續30天后，試驗組與輻照模型對照組均以同一劑量γ射線(xiàn)全身照射一次，輻照后繼續給樣品。根據不同指標選擇不同的照射劑量。
133 外周血白細胞計數照射劑量選擇4Gy。分別于輻照前，輻照后第3天，輻照后第14天三次采末梢血10uL，適量稀釋?zhuān)琈EK6318K血球計數儀計數。
134 小鼠骨髓有核細胞計數照射劑量選擇4Gy。輻照后第3天頸椎脫臼處死小鼠，剝離出股骨，注入一定體積的Hank`s液，吸出股骨中的全部骨髓細胞，使細胞懸液充分分散。稀釋后計數，計算每毫升骨髓細胞懸液中的骨髓有核細胞數。
135 小鼠骨髓細胞微核試驗照射劑量選擇4Gy。輻照后第3天頸椎脫臼死小白鼠，取胸骨骨髓，常規制片，固定，染色，鏡檢。每只動(dòng)物計數1000個(gè)嗜多染紅細胞中微核細胞數，微核率以千分率表示。
136 小鼠血超氧化物歧化酶（SOD）活性檢測照射劑量選擇6Gy。輻照后第7天，制備紅細胞抽提液，用SOD試劑盒測定SOD活力（試劑盒由南京建成生物工程研究所生產(chǎn)提供）。
137 小鼠血清溶血素測定照射劑量選擇2Gy。輻照后第14天，各組每只小鼠腹腔注射02mL2％(v／v)壓積綿羊紅細胞(SRBC)懸液，進(jìn)行免疫。5天后，剝眼球采血，離心，收集血清，用生理鹽水將血清倍比稀釋?zhuān)?7℃溫箱孵育3小時(shí)，觀(guān)察血球凝集程度，計算抗體積數。
14 統計學(xué)方法
采用SPSS100軟件進(jìn)行統計分析，外周血白細胞總數、骨髓有核細胞計數、SOD活力、血清溶血素含量，方差分析檢驗；骨髓細胞微核率，卡方檢驗。
2 結果
21 鮮皇漿對小鼠體重的影響
由表1可見(jiàn)，各組間小鼠初重，輻照前重和輻照后3天、7天、14天與輻照模型對照組比較, 差異均無(wú)顯著(zhù)性(P＞0.05)。

22 鮮皇漿對小鼠外周血白細胞數的影響
由表2可見(jiàn),輻照前各組白細胞總數差異無(wú)顯著(zhù)性（P＞0.05），輻照后第3、14天輻照模型對照組的白細胞總數與輻照前相比較，差異有顯著(zhù)性(P＜0.05)，說(shuō)明輻射損傷模型成立。輻照后第3天、第14天各試驗組白細胞總數顯著(zhù)高于輻照模型對照組，差異均有顯著(zhù)性(P＜0.05)。

23 鮮皇漿對小鼠骨髓有核細胞數的影響
由表3可見(jiàn)，輻照后第三天，各試驗組小鼠骨髓有核細胞數均高于輻照模型對照組，差異均有顯著(zhù)性(P＜0.05)。

24 鮮皇漿對小鼠骨髓細胞微核率的影響
由表4可見(jiàn)，輻照后第3天，中，高劑量試驗組與輻照模型對照組比較，能明顯降低小鼠骨髓細胞微核率,差異有顯著(zhù)性(P＜0.05)。

25 鮮皇漿血中超氧化物歧化酶（SOD）活性的影響由表5可見(jiàn)，各試驗組小鼠紅細胞中SOD活性高于輻照模型對照組，但差異無(wú)顯著(zhù)性(P＞0.05)。

26 鮮皇漿對小鼠輻照后血清溶血素的影響
由表6可見(jiàn)，各試驗組均能提高小鼠血清溶血素抗體積數值，與輻照模型對照組比較，差異均有顯著(zhù)性(P＜0.05 )。

3 討論
電離輻射作用于機體后，可以直接作用于DNA蛋白及酶類(lèi)，引起電離和化學(xué)鍵斷裂，使分子變性和細胞結構破壞；也可以作用于機體內水分子使具發(fā)生電離和激發(fā)，產(chǎn)生大量的具有強氧化性能的自由基，而間接使組織細胞變性、壞死、致使代謝紊亂，引起免疫、神經(jīng)和內分泌系統的調節功能障礙［7］。
骨髓是輻射高度敏感的組織，而外周WBC總數、小鼠骨髓嗜多染紅細胞中微核細胞數、及骨髓有核細胞的含量是反映骨髓損傷的三個(gè)敏感指標［8-9］。本研究表明，小鼠接受4Gy的一次性全身照射后，輻射模型對照組小鼠出現外周WBC計數嚴重降低，骨髓有核細胞數極度下降，骨髓嗜多染紅細胞中微核率明顯增加的重度輻射損傷生物學(xué)效應。而鮮皇漿組動(dòng)物外周血WBC數和骨髓有核細胞數明顯高于輻照模型對照組，骨髓嗜多染紅細胞中微核率明顯低于輻照模型對照組，并且在低劑量組（相當于人推薦劑量的5倍）就已經(jīng)有這種作用，而且具有一定的劑量-反應關(guān)系，表明機體如果較長(cháng)時(shí)間給予劑量不高的鮮皇漿，可能具有一定的抗輻射損傷作用。鮮皇漿內所含多糖和氨基酸可能對小鼠白細胞有直接活化作用，可激發(fā)白細胞活性，增強其吞噬能力，提高機體對輻射的抵御力。另外，鮮皇漿可能能促進(jìn)輻照小鼠造血功能的恢復、多功能造血干細胞的增值和分化，并防止骨髓有核細胞的損傷。
目前認為，輻射損傷的原發(fā)機理是電離輻射所產(chǎn)生的自由基對重要大分子的損害［10］。在輻射損傷發(fā)展過(guò)程中出現的生理學(xué)效應，生物化學(xué)損傷以及形態(tài)學(xué)改變，包括我們以往實(shí)驗所證實(shí)的輻射對造血功能和微核等方面影響都可看成為自由基對機體損傷的一系列繼發(fā)效應。機體在正常生理條件下也能產(chǎn)生少量自由基，不過(guò)很快又被體內某些酶類(lèi)、抗氧化劑等清除。正是這樣一個(gè)不斷產(chǎn)生又不斷被清除的動(dòng)態(tài)平衡，才得以使自由基不在體內堆積，從而維持正常功能。但輻射破壞了這種平衡，它不僅使體內自由基大量產(chǎn)生，而且又能損傷重要的自由基清除物－SOD［11-12］。本研究表明，鮮皇漿能使輻照機體SOD活力增高，但與輻射對照組比較未見(jiàn)顯著(zhù)性差異，可能由于給予鮮皇漿的時(shí)間還不夠長(cháng)，鮮皇漿保存條件要求較高或其他方面原因，需要進(jìn)一步研究。
目前國內尚未見(jiàn)有關(guān)鮮皇漿具有抗輻射作用的報道，我們的研究表明，鮮皇漿具有抗輻射作用功能，這可能與其具有免疫調節功能有關(guān)，本實(shí)驗的結果也發(fā)現，各試驗組用于反映免疫調節功能的指標溶血素的含量與輻射對照組相比，具有顯著(zhù)性差異。許多研究指出，具有免疫調節作用的生理活性物質(zhì)，往往有較好的輻射防護作用［13］。
總之，在研究受照動(dòng)物抗輻射效應及其機理時(shí)，除考慮鮮皇漿作為外源性調控因子對機體產(chǎn)生的有益造血作用外，還應特別注意到照射動(dòng)物受鮮皇漿含有的生理活性成分所誘導的內源性生物抗氧化劑及其還原性物質(zhì)的作用。
鮮皇漿是天然搭配的，按生物生長(cháng)發(fā)育所需要的比例組合的，其礦物質(zhì)的成分和含量幾乎和人的血液相一致，鮮皇漿成本不是很高，來(lái)源也較廣泛，本身就是可食資源，因而具有巨大的開(kāi)發(fā)成抗輻射食品的價(jià)值和前景。
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